Секвениране на EBS гени (2025)

Дълбоко сме благодарни на DEBRA UK, не само за финансирането, но и за вярата им във важността на изследванията в слабо представените региони. Благодарим ви, че направихте тази работа възможна и че ни помогнахте да дадем глас – и отговори – на семействата с EB в Аржентина.

Изследователите са изследвали ДНК-то на 180 души, които изглежда са имали EBS, и са идентифицирали специфичната генетична причина за 161 от тях. 114 души са имали генетични промени в гените за кератин (EBS). Изследователите са открили 27 различни генетични промени в гена за кератин-5, 10 от които никога не са били съобщавани преди.

44 от тези пациенти са имали специфична промяна (наречена KRT5:c.1649del) и са били диагностицирани с EBS с петниста пигментация (тъмни петна по кожата) или EBS с мигриращ цирцинатен еритем (пръстеновидни червени петна). Генетичната работа показа, че тези два подтипа с различни имена всъщност са причинени от една и съща генетична промяна.

Малка част от пациентите не са показали генетични промени в гените за кератин-5 или кератин-14, така че изследователите са проверили други гени, свързани с EB. При 17 души е установена генетична промяна в гена за колаген-7, така че са диагностицирани с дистрофичен EB (DEB). Други 11 души са имали или юнкционален EB (JEB), Kindler EB (KEB), или EBS, причинени от промени в други гени.

Не е открита ясна генетична причина за 19 от 180 души със симптоми, подобни на EBS.

Изследователи са предприели първите стъпки към създаването на национален регистър на пациенти с EB в Аржентина, което им позволява да добият представа колко хора в Аржентина са засегнати от EB за първи път.

Те публикуваха работата си, описваща колко хора са засегнати от ЕБ в... плакат на Световния конгрес по детска дерматология през април 2025 г. и плакат на 2024 Congreso Argentino de Dermatologia. 

Видео актуализация за 2024 г.:

Водещ изследовател: Д-р Лаура Валиното е изследовател в Националния съвет за научни и технически изследвания на Аржентина и главен изследовател (PI) в CEDIGEA. Тя притежава магистърска степен по биотехнологии от Училището по биохимия и фармация в Националния университет на Росарио, Аржентина и е получила докторска степен в Училището по биохимия и фармация в Университета на Буенос Айрес с работата си върху молекулярната епидемиология на респираторните педиатрични вируси инфекции във Вирусологичната лаборатория в Детската болница R. Gutiérrez. Докато завършва своята докторска степен, тя започва да работи като доброволец в отделението по дерматология на болницата, за да намери начин за диагностициране на пациенти с генодерматоза, посещаващи детската държавна болница. Няколко години по-късно тя е един от основателите на Центъра за изследване на генодерматоза и булозна епидермолиза (CEDIGEA) към Университета на Буенос Айрес (UBA). Тук тя продължава работата си по молекулярна диагностика на генодерматози, заедно с епидемиологични молекулярни изследвания на популацията, за да разработи алгоритми за извършване на рентабилна диагностика на пациенти с ниски доходи и изграждане на подробни клинични и молекулярни записи на ЕБ за по-добро разбиране на патогенезата на болестта.

Съизследователи: Професор Грасиела Манзур е професор и ръководител на катедрата по дерматология в Медицинския факултет на Университета в Буенос Айрес. Тя е неонатолог, педиатър и дерматолог и е работила като педиатричен дерматолог в детската болница R. Gutierrez повече от 15 години, където успява да отвори нова секция за редки кожни заболявания в болницата. След няколко години и заедно с мултидисциплинарна група тя основава CEDIGEA, където е директор. След като видя толкова много деца с ЕБ да растат, тя осъзна необходимостта от място, където възрастни пациенти с ЕБ могат да бъдат лекувани, и стартира втори център CEDIGEA, за възрастни, в Hospital de Clínicas към Университета на Буенос Айрес.

Д-р Моника Натале е биохимик, участващ в молекулярната диагностика на генодерматози в детската болница R Gutiérrez. Тя също е един от основателите на CEDIGEA и отговаря за молекулярната лаборатория, идентифицирайки нови случаи на ЕБ и разработвайки нови стратегии за диагностика на други генодерматози.

„Индивидуалната полза за всеки от нашите пациенти с ЕБ е, че молекулярната диагностика ще бъде налична за тях, за да определи вида и подтипа на ЕБ и да предостави недвусмислена диагноза, която е от съществено значение за осигуряване на най-добрите грижи и генетично консултиране. Колективната полза е, че събраната информация за разпространението на вариантите може да бъде полезна за съкращаване на диагностичната одисея за бъдещи пациенти… и да предложи по-точна прогноза. Освен това, в популации с неизследван генетичен произход, тези проучвания биха могли да разкрият неизвестно досега разнообразие от патогенни варианти, които трябва да бъдат взети предвид при определяне на цели за генни терапии.

– Д-р Валиното

Заглавие на безвъзмездната помощ: Молекулярна епидемиология на Epidermolysis Bullosa Simplex в Аржентина.

Една от основните цели на Центъра за изследване на генодерматози и булозна епидермолиза (CEDIGEA) в Аржентина е да предостави на всички пациенти с ЕБ точна диагноза, за да се справи по-добре и по-ефективно със симптомите, от които страдат, да управлява болката и да осигури интердисциплинарна грижа, от която се нуждаят, независимо от тяхното социално състояние. Нашата цел в този проект е да характеризираме нашите пациенти клинично и молекулярно, тъй като няма много доклади от ЕБ в Южна Америка. В CEDIGEA имахме възможност да публикуваме подобно проучване с пациенти с DEB и Kindler и нашата цел е да завършим и публикуваме проучването на пациенти с EBS.

Нашият Център за изследване на генодерматози и булозна епидермолиза (CEDIGEA) към Университета на Буенос Айрес диагностицира и проследява пациенти без здравно осигуряване в Аржентина. Целта на този проект е да открие разпространението и разнообразието на генетични варианти, свързани с EBS в нашата популация, която има неизследван произход. От изключителна важност е възможността да се докладва, ако в нашия регион се открият нови варианти и да се изгради база данни, за да се определи дали могат да се изведат нови асоциации на фенотип и генотип. Този изследователски проект в същото време ще ни позволи да предложим на нашите пациенти с ниски доходи окончателна молекулярна диагноза безплатно.

С помощта на факултета в Буенос Айрес и усилията на професионалистите от CEDIGEA имахме възможността успешно да осъществим предишен проект, включващ пациенти с DEB, където диагностицирахме 181 пациенти от 136 несвързани семейства, откривайки 36 нови варианта и нов фенотип - генотипна асоциация.

Разбиране на булозната епидермолиза в Аржентина: Какво открихме и защо е важно

Този проект се роди от ясна нужда: да се разбере по-добре епидермолизата булоза симплекс (EBS) при хора от Аржентина, група, която е недостатъчно представена в изследванията на EB. Благодарение на финансирането от DEBRA UK, успяхме да проведем проучване, което не само задълбочи познанията ни за това заболяване, но и даде на семействата дългоочаквани отговори.

 Нашата работа се фокусира върху клиничния и генетичен анализ на хора, на които е била поставена диагноза или е имало съмнение за синдром на ЕБ. Проучихме повече от 180 души от 121 семейства, които дойдоха в нашия център (CEDIGEA, базиран в Университета на Буенос Айрес) със симптоми, предполагащи ЕБ или друг вид ЕБ. Повечето от тези семейства живеят в уязвими условия и имат ограничен или никакъв достъп до специализирани грижи.

За да идентифицираме генетичната причина за тяхното състояние, започнахме с анализ на ключови региони (наречени „екзони“) на два гена, за които е известно, че участват в EBS: KRT5 и KRT14. Въз основа на по-ранните ни открития при местни пациенти, първо се фокусирахме върху екзони 1 и 9 на KRT5 и екзони 1 и 6 на KRT14. Тази стратегия се оказа много ефективна и достъпна. До май 2024 г. открихме генетичната причина за 104 пациенти от 59 семейства.

След това разширихме анализа си към други части на същите гени и открихме още 10 генетични промени, засягащи 29 пациенти. С пристигането на още семейства, диагностицирахме още девет индивида. Общо открихме 27 различни варианта в гена KRT5, 10 от които никога не са били докладвани преди. Един вариант по-специално – наречен KRT5:c.1649del – се открояваше. Той беше открит при 44 души от 16 несвързани семейства и преди това е бил докладван само в 11 семейства по целия свят.

Когато разгледахме по-внимателно тези 44 пациенти, забелязахме нещо забележително: въпреки че някои бяха диагностицирани с EBS с петниста пигментация (тъмни петна по кожата), други имаха пръстеновидни червени петна (вид, известен като EBS-MCE). Осъзнахме, че това не са два различни подтипа, а част от един и същ спектър на заболяването. С други думи, симптомите могат да се променят с времето, но основната причина е една и съща. Осъзнаването на това помага на лекарите да дават по-добри съвети и да предвиждат как може да се развие заболяването.

Обобщихме тези открития в научна статия, озаглавена „Епидермолиза Булоза Симплекс с петниста пигментация и мигриращ кръгов еритем: Различни подтипове или континуум?“, която представихме в специализирано списание. Това е първата от поредица от три статии, които планираме да публикуваме с резултати от този проект.

Не всички пациенти са имали ЕБ. За тези, които все още не са диагностицирани след първия кръг от тестове, секвенирахме други гени, особено COL7A1, който е свързан с дистрофичен ЕБ (DEB). Тази стратегия доведе до още 17 диагнози. За останалите 30 пациенти използвахме усъвършенствани техники за секвениране, които ни позволиха да изследваме много гени едновременно. Диагностицирахме още 11 пациенти със смесени видове ЕБ, включително юнкционален ЕБ, Kindler ЕБ и ЕБ, причинен от по-редки гени като PLEC и KLHL24. В крайна сметка открихме ясен генетичен отговор за 161 от 180-те пациенти.

Тази работа е от огромно значение за семействата. Получаването на окончателна диагноза не само слага край на несигурността, но и отваря врати към по-добри грижи, генетично консултиране и в крайна сметка достъп до лечение или клинични изпитвания.

Защо тази работа е важна

Едно от най-изненадващите открития беше колко често срещан е вариантът KRT5:c.1649del в нашата популация, в сравнение с рядкостта му другаде. Това подчертава важността на изучаването на EB в различни части на света. Ако изследванията се провеждат само в Европа или Северна Америка, ще пропуснем ключови части от пъзела.

Също така успяхме да реконструираме как този вариант на заболяването вероятно се е разпространил сред семейства в специфичен регион на североизточна Аржентина. Това откритие потвърждава идеята за основателска мутация, предадена от общ прародител. Разбирането на тези модели може да помогне за насочване на бъдещите скринингови и диагностични методи в региона.

Отвъд науката, този проект имаше по-широко въздействие. Подкрепата на DEBRA UK даде видимост на нашата работа и насърчи повече лекари в Аржентина и съседните страни да насочват пациенти към нас. В резултат на това предприехме първите стъпки към създаването на национален регистър на пациенти с ЕБ в Аржентина, събирайки данни от четирите основни центъра, грижещи се за хора с ЕБ. Това ни позволи да направим предварителна оценка за това колко често срещан е ЕБ в нашата страна – нещо, което никога преди не беше правено.

Преодоляване на предизвикателствата

Въпреки успеха, пътят не беше лесен. Аржентина преминава през една от най-тежките икономически кризи в историята си. Сблъскахме се със сериозни забавяния при вноса на реагенти, справянето с инфлацията и адаптирането към променящите се цени. В един момент трябваше напълно да преразгледаме първоначалния си план, тъй като не можехме да купим реагентите, на които се надявахме. Въпреки това, благодарение на шестмесечното удължаване, предоставено от DEBRA UK, и промяната в стратегията, успяхме да постигнем всичките си цели.

Какво следва?

В момента работим по две допълнителни научни статии от този проект. Продължаваме да проследяваме пациентите и да споделяме откритията си с местни дерматолози и педиатри, за да подобрим ранната диагностика в цялата страна. Регистърът, който стартирахме, ще бъде ключов инструмент за планиране на политиките за обществено здраве, предоставяне на по-добра подкрепа на семействата и – надяваме се – ще ни доближи с една крачка до достъпни лечения. (От окончателния доклад за 2025 г.)

Дълбоко сме благодарни на DEBRA UK, не само за финансирането, но и за вярата ви във важността на изследванията в недостатъчно представените региони. Благодарим ви, че направихте тази работа възможна и че ни помогнахте да дадем глас – и отговори – на семействата с EB в Аржентина.

(От окончателния доклад от юни 2025 г.)

Постигнахме значителен напредък в нашия проект в Центъра за изследване на генодерматоза и булозна епидермолиза (CEDIGEA). Понастоящем сме набрали 180 пациенти от 121 семейства, които са били насочени към нас поради клинично подозрение за булозна епидермолиза симплекс (EBS) или друга булозна епидермолиза от неопределен тип.

Основната ни цел беше да извършим генетичен анализ, за ​​да предоставим молекулярни диагнози и в същото време да научим за генетичната основа на болестта в нашата популация. Досега сме анализирали специфични гени и сме постигнали молекулярна диагноза за 104 пациенти, което е значително постижение. По този начин ние идентифицирахме 31 различни патогенни варианта, като 12 от тях не са докладвани досега в литературата.

По време на нашия проект обаче възникнаха предизвикателства. Срещнахме забавяне в набавянето на необходимите реактиви за генетично секвениране поради икономическата нестабилност и променящите се регулации в страната ни, като цените на лабораторните консумативи бяха с 300% по-високи от преди три години. Поради тези предизвикателства се наложи да преразгледаме стратегията си, за да се възползваме максимално от нашите безвъзмездни средства и да гарантираме навременно изпълнение на нашите цели.

Що се отнася до публикациите, ние подготвяме изчерпателен ръкопис, за да представим нашите открития. Ние вярваме, че чрез изучаване на такъв голям брой случаи ще можем да открием особеностите при всеки пациент и групи от пациенти и тези данни ще бъдат полезни за прогнозиране как ще се развие заболяването при бъдещи пациенти.

Що се отнася до участието на пациентите, Магдалена и Жозефина изиграха важна роля. Чрез техния блог „En mi piel“ те предоставиха ценна информация и създадоха платформа за пациентите да споделят своя опит. Този ориентиран към пациента подход ръководи нашия изследователски фокус и гарантира, че работата ни е насочена към нуждите на засегнатите от Булозна епидермолиза и други редки кожни заболявания.

В обобщение, въпреки предизвикателствата, нашият проект напредва добре и ние се ангажираме да напредваме в изследванията в областта на Булозна епидермолиза в полза на пациентите по целия свят.

И ние не искаме да пропуснем тази възможност да ви поканим на V Аржентински конгрес по генодерматози и булозна епидермолиза, във виртуален формат, на 19, 20 и 21 септември 2024 г. За да сте в течение, следвайте ни в нашия Instagram @cedigea .uba

(От доклад за напредъка от май 2024 г.)